申请(专利)号： CN201810502584.0

申请权利人： 莫云芬;

名称：抗HIV病毒的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物及其应用

本发明公开了一种抗HIV病毒的含硫多环‑羟基吡啶酮甲酰胺类似物及其应用。所述含硫多环‑羟基吡啶酮甲酰胺类似物，具有下式(I)化合物或其立体异构体或可药用盐：本发明提供的含硫多环‑羟基吡啶酮甲酰胺类似物均具有良好的抗HIV活性，尤其化合物2、化合物18和化合物34和化合物66体外对HIV‑1复制的抑制作用非常强，其对HIV病毒的治疗指数达到现有药物TDF和Dolutegravir药物的上百倍，该类化合物的开发对艾滋病药物的研制具有十分重要的意义，将为艾滋病患者带来福音。

主权项：
1.一种抗HIV病毒活性的含硫多环‑羟基吡啶酮甲酰胺类似物，具有下式(I)化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐：其中，Z选自S，SO，SO2；R0为氢、卤素、羟基、任选取代的低级烷基或任选取代的低级链烯基、各自可被选自以下的杂原子基团插入：OR6、SR6、SOR6、SO2R6、NR6；R6为氢、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基、羟基、任选的氨基、任选取代的磷酸基；每个Ra独立为氢、卤素、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基；n为0到8的整数；n为0时表示所在环为五元环；R1为氢、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基；R2为氢、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基；R3,R3’各自独立为氢、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基、羟基、任选的氨基、任选取代的磷酸基；R4,R5各自独立为氢或任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环；或其中R4和R5结合在一起形成‑W‑，其中W为[C(Rb)2]L(L为1到4的整数)；每个Rb独立为氢、卤素、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基。
说明书：
抗HIV病毒的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物及其应用
技术领域

本发明涉及抗病毒药物技术领域，具体涉及一种抗HIV病毒活性的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物及其应用。

背景技术

自从1981美国发现第一例艾滋病患者，这种传染性疾病开始困扰着人类文明。病毒和人类的共存对于彼此都是为生存而斗争因为侵入者可杀死人但是也正在消灭它们自己的宿主。机体利用它的免疫系统保护自己免受细菌，病毒和其他引起疾病，而失败时发生免疫缺陷疾病。这类疾病被称为获得性免疫缺陷综合征爱滋病(AIDS)，是被人类免疫缺陷病毒(HIV)感染后最常见的结果。曾鉴定两种密切相关类型的HIV，HIV-1和HIV-2。而HIV-2在印度和西非播散，HIV-1更致命和世界上第一爱滋病的原因。虽然患者有些有不同结果，在大多数病例中HIV感染者继续发展成爱滋病AIDS和最终死于机遇性感染或癌症。

人类免疫缺陷病毒(HIV)是一种逆转录酶病毒，引起获得性免疫缺陷综合征爱滋病(AIDS)。用于AIDS的治疗剂主要选自一组逆转录酶抑制剂(如，AZT，3TC及阿巴卡韦)和蛋白酶抑制剂(如，Indinavir，Amprenavir)，但它们被证实伴有副作用如肾病和出现抗药性病毒。因此渴望开发具有其他作用机制的抗-HIV药物。

另外有报道由于耐药突变体的频繁出现，联合治疗可有效治疗AIDS。逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂在临床上用作抗-HIV药物，然而具有相同作用机制的药物常常显示交叉抗药性。因此需要具有其它作用机制的作抗-HIV药物。

在以上情况下，HIV整合酶抑制剂的开发集中在具有新的作用机制的抗-HIV药物。整合作用对逆病毒基因组对基因表达和病毒复制是至关重要的。病毒基因组被病毒逆转录酶被逆向地转录至被感染细胞的DNA，然后借助于病毒整合酶DNA被整合至宿主细胞染色体。从被整合的病毒DNA生成RNA转录和用如mRNAs指导病毒蛋白的合成和后作为新病毒颗粒RNA基因组。从质膜通过芽生病毒颗粒从细胞逃逸，各封闭在包膜[membrane envelope]内。在这个过程中HIV-1整合酶是重要和因此对抗-AIDS药物设计非常有前途的靶点。

已被发现整合酶抑制剂突变引起体内和体外耐药的超过60个变异。由于这些突变和耐药的发生抑制剂是对病毒有效较低[Drug resistance updates 2010,13(4–5),139–150]。整合酶抑制剂的耐药相当于其他抗逆转录病毒药物。首先整合酶耐药通过主要突变减低整合酶抑制剂敏感性与次要突变进一步减低病毒敏感性和/或减低病毒适当性修复的结合引起的。第二对整合酶抑制剂耐药有遗传屏障，被定义为对丧失临床整合酶抑制剂活性需要的突变数。第三有广泛但整合酶抑制剂之中不完全交叉-耐药[The Joournal of infectious diseases 2011,203(9),1201-1214]。一个环含氨基酸140–149残基位于催化核心结构区和如上所述对整合酶功能是重要的。这个环是灵活的和甚至虽然其作用不十分知道它被认为是重要的和其功能对DNA结合至关重要。耐药性似乎在这个整合酶-编码区内突变[Drug resistance updates 2010,13(4–5),139–150]。对拉替拉韦和elvitegravir的耐药主要是由于相同的两条突变途径但对药物的每一个也涉及其他主要突变[Clinical therapeutics 2008,30(10),1747-1765]。自从对拉替拉韦和elvitegravir有耐药问题，新一代整合酶抑制剂的开发依然是一个重要的研究方向。其中多环-羟基吡啶酮甲酰胺衍生物是一类新型的具有抗病毒活性的化合物，如Dolutegravir(专利文件WO2006/116764)及Bictegravir(专利文件WO2014/100323)。目前已上市的Dolutegravir仍然存在耐药性的问题，因此开发新型的抗HIV病毒药物具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种抗HIV病毒活性的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物及其应用。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案如下：

一种抗HIV病毒活性的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物，具有下式(I)化合物或其立体异构体或可药用盐：



其中，Z选自S，SO，SO2；

R0为氢、卤素、羟基、任选取代的低级烷基或任选取代的低级链烯基、各自可被选自以下的杂原子基团插入：OR6、SR6、SOR6、SO2R6、NR6；R6为氢、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基、羟基、任选的氨基、任选取代的磷酸基；

每个Ra独立为氢、卤素、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基；

n为0到8的整数；n为0时表示所在环为五元环；

R1为氢、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基；

R2为氢、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基；

R3,R3’独立为氢、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基、羟基、任选的氨基、任选取代的磷酸基；

R4,R5各自独立为氢或任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环；

或其中R4和R5结合在一起形成-W-，其中W为[C(Rb)2]L(L为1到4的整数)；

每个Rb独立为氢、卤素、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基。

优选地，一种抗HIV病毒活性的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物，具有下式(I-A)化合物或其立体异构体或可药用盐：



其中，Z选自S，SO，SO2；

其中R0、Ra、n、R3、R3’、R4、R5各自基团的选取如前所述；

X各自独立为氢、卤素、羟基、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基、羟基、任选的氨基、任选取代的磷酸基；

m为0-3的整数，优选1-3；

当m为1时，X优选为卤素；更优选位于所述苯环的2-位的氟或4-位的氟；

当m为2时，X优选为卤素；更优选位于所述苯环的2-位的氟和4-位的氟、2-位的氟和3-位的氟、2-位的氟和6-位的氟、3-位的氟和4-位的氟、3-位的氟和4-位的氯、2-位的氟和4-位的氯或2-位的氯和4-位的氟；最优选为位于所述苯环的2-位的氟和4-位的氟；

当m为3时，X优选为卤素；更优选位于所述苯环的2-位的氟，4-位的氟和6-位的氟或2-位的氟，3-位的氟和4-位的氟，最优选位于所述苯环的2-位的氟，4-位的氟和6-位的氟。

优选地，一种抗HIV病毒活性的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物，具有下式(I-B)化合物或其立体异构体或可药用盐：



其中，Z选自S，SO，SO2；

其中R0、Ra、n、R3、R3’各自基团的选取如前所述；

其中W为[C(Rb)2]L(L为1到4的整数)；

每个Rb独立为氢、卤素、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基；

X各自独立为氢、卤素、羟基、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基、羟基、任选的氨基、任选取代的磷酸基；

m为0-3的整数，优选1-3；

当m为1时，X优选为卤素；更优选位于所述苯环的2-位的氟或4-位的氟；

当m为2时，X优选为卤素；更优选位于所述苯环的2-位的氟和4-位的氟、2-位的氟和3-位的氟、2-位的氟和6-位的氟、3-位的氟和4-位的氟、3-位的氟和4-位的氯、2-位的氟和4-位的氯或2-位的氯和4-位的氟；最优选为位于所述苯环的2-位的氟和4-位的氟；

当m为3时，X优选为卤素；更优选位于所述苯环的2-位的氟，4-位的氟和6-位的氟或2-位的氟，3-位的氟和4-位的氟，最优选位于所述苯环的2-位的氟，4-位的氟和6-位的氟。

优选地，一种抗HIV病毒活性的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物，具有下式(I-C)化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐：



其中，Z选自S，SO，SO2；

其中R0、R1、R2、R3、R3’、R4、R5各自基团的选取如前所述。

优选地，一种抗HIV病毒活性的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物，具有下式(I-D)化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐：



其中，Z选自S，SO，SO2；

其中R0、R3、R3’、Ra、R4、R5各自基团的选取如前所述；

X各自独立为氢、卤素、羟基、任选取代的低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基低级烷基、任选取代的低级链烯基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳基低级烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环低级烷基、任选取代的杂环氧基、羟基、任选的氨基、任选取代的磷酸基；

m为0-3的整数，优选1-3；

当m为1时，X优选为卤素；更优选位于所述苯环的2-位的氟或4-位的氟；

当m为2时，X优选为卤素；更优选位于所述苯环的2-位的氟和4-位的氟、2-位的氟和3-位的氟、2-位的氟和6-位的氟、3-位的氟和4-位的氟、3-位的氟和4-位的氯、2-位的氟和4-位的氯或2-位的氯和4-位的氟；最优选为位于所述苯环的2-位的氟和4-位的氟；

当m为3时，X优选为卤素；更优选位于所述苯环的2-位的氟，4-位的氟和6-位的氟或2-位的氟，3-位的氟和4-位的氟，最优选位于所述苯环的2-位的氟，4-位的氟和6-位的氟。

优选地，一种抗HIV病毒活性的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物，具有化合物A3或化合物A6或化合物A7的结构，或所述化合物的立体异构体或其药学上可接受的盐：





优选地，一种抗HIV病毒活性的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物，其结构为下列1-93序号的化合物或其对映异构体；其非对映异构体；其对映异构体的混合物；其非对映异构体的混合物；其对映异构体和非对映异构体的混合物；及其药学上可接受的盐；









优选地，所述药学上可接受的盐为钠盐或钾盐。

本发明还提供一种药物组合物，包含权利要求1-5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者溶剂合物为活性组分。

优选地，所述药物组合物进一步含有一种或多种另外的抗HIV治疗剂。

优选地，所述药物组合物进一步含有药物学上可接受的载体。

本发明还提供所述的化合物或其药学上可接受的盐或者溶剂合物在制备抗HIV病毒药物中的应用。所述抗HIV病毒药物为抗艾滋病药物。

本发明还提供了所述化合物A3的制备方法，该方法为：



化合物A1与氨基硫醇类化合物在酸(比如甲酸或乙酸或丙酸或甲磺酸对甲苯磺酸或三氟甲磺酸镁)催化下进行加热缩合，转化成化合物A2，化合物A2脱去保护基P，生成化合物A3。

本发明还提供了所述化合物A3的另一种制备方法，该方法为：



化合物A4与氨基硫醇类化合物在酸催化下加热缩合，生成化合物A5；通过胺和偶联试剂将化合物A5转化成酰胺，然后脱去保护基P，得到化合物A3。

本发明还提供了所述化合物A6的制备方法，该方法为：



通过加入氧化剂，比如过氧有机酸类酸(m-CPBA或过氧乙酸或过氧三氟乙酸等)或双氧水(磷钼酸催化)或过氧叔丁醇，将化合物A3转化生成化合物A6。

本发明还提供了所述化合物A7的制备方法，该方法为：



通过加入氧化剂，比如过氧有机酸类酸(m-CPBA或过氧乙酸或过氧三氟乙酸等)或双氧水(磷钼酸催化)或过氧叔丁醇，将化合物A3转化生成化合物A7。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明提供的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物均具有良好的抗HIV活性，尤其化合物2、化合物18和化合物34和化合物66体外对HIV-1复制的抑制作用非常强，其对HIV病毒的治疗指数达到现有药物TDF和Dolutegravir药物的上百倍，该类化合物的开发对艾滋病药物的研制具有十分重要的意义，将为艾滋病患者带来福音。

具体实施方式

以下通过具体实施例来说明本发明的技术方案。本发明中所用的原料和试剂均市售可得。

本发明含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物的一般合成方案：

提供方案1-3作为本发明的进一步实施方案，且示例说明用于制备具有式(I)的化合物且可用于制备另外的具有式(I)的化合物的一般方法。

方案1



通过A1与合适的氨基硫醇在合适的酸催化及加热缩合，可以将A1转化成A2，A2接着脱保护基P，形成A3。

方案2



通过A4与合适的氨基硫醇在合适的酸催化及加热缩合，可以将A4转化成A5。通过用合适的胺和偶联试剂比如HATU或CDI或HOBt可以将A5转化成酰胺，接着脱保护基P，形成A3。

方案3



通过用合适的氧化剂可以将A3转化成亚砜A6或者砜A7。

实施例1

化合物1的制备



化合物的制备路线如下所示：



化合物的具体步骤如下：

步骤1

向化合物1-S0：(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇(1.75g，10mmol)与三乙胺(2.1g，20mmol)、DCM(30mL)的溶液，于0℃下滴加甲磺酰氯(1.3g，11mmol)，反应约2小时后加入水淬灭反应；分液有机层分别用1N稀盐酸、饱和食盐水洗涤硫酸钠干燥浓缩得粗品1-S1(2.5g)，不纯化直接做下一步反应。

步骤2

硫代乙酸钾(1.7g，15mmol)溶于DMF(10mL)，然后加入到来自步骤1的粗品中间体1-S1(2.5g，10mmol)的DMF(15mL)溶液中，60℃反应3小时，冷却到室温加入甲叔醚(80mL)，接着饱和食盐水洗，硫酸钠干燥浓缩得粗品1-S2(2.5g)，不纯化直接做下一步反应。

步骤3

将来自步骤2的粗品中间体1-S2(2.5g)溶于甲醇(15mL)，然后加入氢氧化钠(400mg，10mmol)，室温反应2小时，浓缩去除甲醇加入甲叔醚并调pH＝3，分液有机层饱和食盐水洗，硫酸钠干燥浓缩得粗品1-S3(2.0g)，不纯化直接做下一步反应。

步骤4

将来自步骤3的粗品中间体1-S3(2.0g)溶于2N氯化氢甲醇溶液(20mL)，室温反应2小时，浓缩去除氯化氢甲醇溶液加入甲叔醚析出固体并打浆，过滤出固体即1-S(2R)-2-氨基-1-丙硫醇盐酸盐(0.8g)；1-S(2R)-2-氨基-1-丙硫醇盐酸盐(0.8g)溶于甲醇然后加入碳酸氢钠(840mg)中和盐酸盐，过滤，滤液浓缩得到1-S，即(2R)-2-氨基-1-丙硫醇(600mg)。

步骤5

向A-0(395mg，1mmol)的二氯乙烷(40mL)溶液中加入(2R)-2-氨基-1-丙硫醇(136mg，1.5mol)和醋酸(60mg)。接着反应液回流反应2小时。冷却后加入适量硅胶拌样，通过硅胶柱层析纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得到化合物A-1(310mg,70％yield)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)10.41(br,1H),8.41(s,1H),7.36(m,1H),6.82(m,2H),5.24-5.10(m,2H),4.64(m,2H),4.28(m,1H),4.12(m,1H),4.08(s,3H),3.31(m,1H),2.82(m,1H),1.45(d,J＝6.4Hz,3H)。ESI+(m/z):436(M+1).步骤6

向A-1(220mg，0.5mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入溴化镁(200mg，1.68mmol)，然后升温到50℃下搅拌反应2小时之后，冷却到0℃加入0.5N稀盐酸(10mL)。再用水(50mL)稀释，用二氯甲烷(50mL)萃取该产物，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩。通过硅胶柱层析纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得到化合物1(162mg,75％yield)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.00(br,1H),10.40(br,1H),8.42(s,1H),7.38(m,1H),6.83(m,2H),5.23-5.12(m,2H),4.73-4.45(m,2H),4.24(m,1H),4.10(m,1H),3.35(m,1H),2.90(m,1H),1.46(d,J＝6.4Hz,3H)。ESI+(m/z):422(M+1)。

实施例2

化合物2的制备



采用化合物1的方法，使用(S)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物2.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.84(br,1H),10.39(br,1H),8.41(s,1H),7.39(m,1H),6.84(m,2H),5.21-5.11(m,2H),4.75-4.47(m,2H),4.23(m,1H),4.10(m,1H),3.35(m,1H),2.87(m,1H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H)。ESI+(m/z):422(M+1).

实施例3

化合物3的制备



采用化合物1的方法，使用(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丁醇代替(2R)-2(Boc-氨基)-1-丙醇-1-丙醇，制备化合物3.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.40(br,1H),8.38(s,1H),7.33(m,1H),6.80(m,2H),5.21(m,2H),4.60(m,2H),4.22(m,1H),4.08(m,1H),3.32(m,1H),2.90(m,1H),2.11(m,1H),1.72(m,1H),0.97(m,3H)。ESI+(m/z):436(M+1).

实施例4

化合物4的制备



采用化合物1的方法，使用(2S)-2-(Boc-氨基)-1-丁醇代替(2R)-2(Boc-氨基)-1-丙醇-1-丙醇，制备化合物4.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.88(br,1H),10.41(br,1H),8.39(s,1H),7.35(m,1H),6.81(m,2H),5.20(m,2H),4.61(m,2H),4.20(m,1H),4.09(m,1H),3.33(m,1H),2.90(m,1H),2.10(m,1H),1.71(m,1H),0.96(m,3H)。ESI+(m/z):436(M+1).

实施例5

化合物5的制备



采用化合物1的方法，使用(2R)-2-(Boc-氨基)-3-甲基-1-丁醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物5.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.93(br,1H),10.30(br,1H),8.43(s,1H),7.36(m,1H),6.82(m,2H),5.23(m,2H),4.63(m,2H),4.22(m,1H),4.12(m,1H),3.33(m,1H),2.92(m,1H),2.32(m,1H),0.99(m,6H)。ESI+(m/z):450(M+1).

实施例6

化合物6的制备



采用化合物1的方法，使用(2S)-2-(Boc-氨基)-3-甲基-1-丁醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物6.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.91(br,1H),10.39(br,1H),8.40(s,1H),7.35(m,1H),6.80(m,2H),5.22(m,2H),4.61(m,2H),4.21(m,1H),4.11(m,1H),3.32(m,1H),2.91(m,1H),2.33(m,1H),0.98(m,6H)。ESI+(m/z):450(M+1).

实施例7

化合物7的制备



采用化合物1的方法，使用(2R)-2-(Boc-氨基)-3，3-二甲基-1-丁醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物7.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.35(br,1H),8.38(s,1H),7.34(m,1H),6.79(m,2H),5.25(m,2H),4.61(m,2H),4.23(m,1H),4.13(m,1H),3.33(m,1H),2.90(m,1H),1.05(m,9H)。ESI+(m/z):464(M+1).

实施例8

化合物8的制备



采用化合物1的方法，使用(2S)-2-(Boc-氨基)-3，3-二甲基-1-丁醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物8.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.38(br,1H),8.41(s,1H),7.34(m,1H),6.81(m,2H),5.27(m,2H),4.62(m,2H),4.22(m,1H),4.13(m,1H),3.32(m,1H),2.91(m,1H),1.01(m,9H)。ESI+(m/z):464(M+1).

实施例9

化合物9的制备



采用化合物1的方法，使用(2R)-2-(Boc-氨基)-2-苯基-1-乙醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物9。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.86(br,1H),10.40(br,1H),8.40(s,1H),7.45-7.30(m,6H),6.81(m,2H),5.60(m,1H),5.25(m,1H),4.75-4.47(m,2H),4.25(m,1H),4.13(m,1H),3.33(m,1H),2.90(m,1H)；ESI+(m/z):484(M+1).

实施例10

化合物10的制备



采用化合物1的方法，使用(2R)-2-(Boc-氨基)-2-苯基-1-乙醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物10。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.86(br,1H),10.40(br,1H),8.40(s,1H),7.45-7.30(m,6H),6.81(m,2H),5.60(m,1H),5.25(m,1H),4.75-4.47(m,2H),4.25(m,1H),4.13(m,1H),3.33(m,1H),2.90(m,1H)；ESI+(m/z):484(M+1).

实施例11

化合物12的制备



采用化合物1的方法，使用(2S)-2-(Boc-氨基)-3-苯基-1-丙醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇制备化合物12。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.88(br,1H),10.40(br,1H),8.40(s,1H),7.39-7.15(m,6H),6.83(m,2H),5.20-5.08(m,2H),4.75-4.47(m,2H),4.25(m,1H),4.13(m,1H),3.36-3.33(m,2H),2.96-2.88(m,2H)；ESI+(m/z):498(M+1).

实施例12

化合物19的制备



采用化合物1的方法，使用(2R)-2-(Boc-氨基)-4-甲基-1-戊醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物19。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.01(br,1H),10.40(br,1H),8.41(s,1H),7.39(m,1H),6.82(m,2H),5.24-5.12(m,2H),4.74-4.43(m,2H),4.25(m,1H),4.11(m,1H),3.35(m,1H),2.91(m,1H),2.06(m,1H),1.65(m,1H),1.41(m,1H)，0.99(m,6H)。ESI+(m/z):464(M+1).

实施例13

化合物20的制备



采用化合物1的方法，使用(2S)-2-(Boc-氨基)-4-甲基-1-戊醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物20。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.00(br,1H),10.41(br,1H),8.40(s,1H),7.37(m,1H),6.80(m,2H),5.23-5.12(m,2H),4.74-4.43(m,2H),4.23(m,1H),4.10(m,1H),3.34(m,1H),2.90(m,1H),2.04(m,1H),1.63(m,1H),1.40(m,1H)，1.0(m,6H)。ESI+(m/z):464(M+1).

实施例14

化合物17的制备



采用化合物1的方法，使用(3S)-3-(Boc-氨基)-1-丁醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物17。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.46(s,1H),10.42(br,1H),8.31(s,1H),7.35(m,1H),6.82(m,2H),5.23-5.11(m,2H),4.66-4.45(m,3H),4.12(d,J＝13.6Hz,1H),3.30(m,1H),2.70(m,1H),2.09(m,1H),1.81(m,1H),1.40(d,J＝6.8Hz,3H)。ESI+(m/z):436(M+1).

实施例15

化合物18的制备



采用化合物1的方法，使用(3R)-3-(Boc-氨基)-1-丁醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物18。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.45(s,1H),10.42(br,1H),8.32(s,1H),7.36(m,1H),6.82(m,2H),5.23-5.12(m,2H),4.65-4.47(m,3H),4.11(d,J＝13.6Hz,1H),3.31(m,1H),2.71(m,1H),2.10(m,1H),1.83(m,1H),1.38(d,J＝6.8Hz,3H)。ESI+(m/z):436(M+1).

实施例16

化合物26的制备



采用化合物1的方法，使用(1S,3S)-3-(Boc-氨基)-1-环戊醇代替(2R)-2-(Boc-氨基)-1-丙醇，制备化合物26。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.46(s,1H),10.45(br,1H),8.33(s,1H),7.36(m,1H),6.85(m,2H),5.33(m,1H),4.72(m,2H),4.09(m,1H),3.95-3.72(m,2H),3.35(m,1H),1.96(s,4H),1.81(d,J＝12Hz,1H),1.62(t,J＝12,4Hz,1H)。ESI+(m/z):448(M+1).

实施例17

化合物34的制备



步骤1

向化合物A4(269mg，1mmol)的二氯乙烷(50mL)溶液中加入(1R,3S)-3-氨基-1-环戊硫醇(176mg，1.5mol)和醋酸(60mg)。接着反应液回流反应5小时。冷却后加入二氯甲烷稀释并分别用0.5N HCl(5mL)、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩得到粗品A4-0(270mg)，不纯化直接下一步骤反应用。LCMS-ESI-(m/z):335(M-1).

步骤2

将来自步骤1的粗品中间体A4-0(270mg，0.8mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，380mg，1mmol)和2,4,6-三氟苄胺(161mg，1mmol)悬浮于四氢呋喃(5mL)中，然后0℃下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIEPA，200mg，1.6mmol)，滴加完毕后升到25℃反应2小时后加入二氯甲烷(50mL)稀释并分别用0.5N稀盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩得到粗品A4-34(350mg)，不纯化直接下一步骤反应用。LCMS-ESI+(m/z):480(M+1).

步骤3

向来自步骤2的粗品中间体A4-34(350mg，0.7mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入溴化镁(200mg，1.68mmol)，然后升温到50℃下搅拌反应2小时之后，冷却到0℃加入0.5N稀盐酸(10mL)。再用水(50mL)稀释，用二氯甲烷(50mL)萃取该产物，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩。通过硅胶柱层析纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得到化合物34(162mg,75％yield)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.44(s,1H),10.41(br,1H),8.35(s,1H),7.20(m,2H),5.35(m,1H),4.72(m,2H),4.08(m,1H),3.98-3.71(m,2H),3.33(m,1H),1.98(s,4H),1.85(d,J＝12Hz,1H),1.61(t,J＝12,4Hz,1H)。ESI+(m/z):466(M+1).

实施例18

化合物40的制备



步骤1

向化合物A4(269mg，1mmol)的二氯乙烷(50mL)溶液中加入(3R)-3-氨基-1-丁硫醇(160mg，1.5mol)和醋酸(60mg)。接着反应液回流反应2小时。冷却后加入二氯甲烷稀释并分别用0.5N HCl(5mL)、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩得到粗品A4-1(260mg)，不纯化直接下一步骤反应用。LCMS-ESI-(m/z):323(M-1).

步骤2

将来自步骤1的粗品中间体A4-1(260mg，0.8mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，380mg，1mmol)和2,4,6-三氟苄胺(161mg，1mmol)悬浮于四氢呋喃(5mL)中，然后0℃下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIEPA，200mg，1.6mmol)，滴加完毕后升到25℃反应2小时后加入二氯甲烷(50mL)稀释并分别用0.5N稀盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩得到粗品A4-40(300mg)，不纯化直接下一步骤反应用。LCMS-ESI+(m/z):418(M+1).

步骤3

向来自步骤2的粗品中间体A4-40(300mg，0.64mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入溴化镁(200mg，1.68mmol)，然后升温到50℃下搅拌反应2小时之后，冷却到0℃加入0.5N稀盐酸(10mL)。再用水(50mL)稀释，用二氯甲烷(50mL)萃取该产物，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩。通过硅胶柱层析纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得到化合物40(150mg,51％yield)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.44(s,1H),10.40(br,1H),8.30(s,1H),7.19(m,2H),5.21-5.10(m,2H),4.66-4.45(m,3H),4.10(m,1H),3.33(m,1H),2.72(m,1H),2.09(m,1H),1.81(m,1H),1.38(d,J＝7.2Hz,3H)。ESI+(m/z):454(M+1).

实施例19

化合物59的制备



采用化合物40的制备方法，使用对氟苄胺代替2,4,6-三氟苄胺，制备化合物59。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.40(s,1H),10.40(br,1H),8.33(s,1H),7.30(m,2H),7.00(m,2H),5.23-5.12(m,2H),4.62-4.40(m,3H),4.10(d,J＝13.6Hz,1H),3.30(m,1H),2.70(m,1H),2.8(m,1H),1.80(m,1H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H)。ESI+(m/z):418(M+1).

实施例20

化合物66的制备



步骤1

向化合物A4(269mg，1mmol)的二氯乙烷(50mL)溶液中加入(3S)-2-氨基-1-丙硫醇(155mg，1.5mol)和醋酸(60mg)。接着反应液回流反应2小时。冷却后加入二氯甲烷稀释并分别用0.5N HCl(5mL)、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩得到粗品A4-066(250mg)，不纯化直接下一步骤反应用。LCMS-ESI-(m/z):310(M-1).

步骤2

将来自步骤1的粗品中间体A4-066(250mg，0.8mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，380mg，1mmol)和2,4,6-三氟苄胺(161mg，1mmol)悬浮于四氢呋喃(5mL)中，然后0℃下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIEPA，200mg，1.6mmol)，滴加完毕后升到25℃反应2小时后加入二氯甲烷(50mL)稀释并分别用0.5N稀盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩得到粗品A4-66(280mg)，不纯化直接下一步骤反应用。LCMS-ESI+(m/z):418(M+1).

步骤3

向来自步骤2的粗品中间体A4-66(280mg，0.6mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入溴化镁(200mg，1.68mmol)，然后升温到50℃下搅拌反应2小时之后，冷却到0℃加入0.5N稀盐酸(10mL)。再用水(50mL)稀释，用二氯甲烷(50mL)萃取该产物，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩。通过硅胶柱层析纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得到化合物66(150mg)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.82(br,1H),10.39(br,1H),8.43(s,1H),7.30(m,2H),6.99(m,2H),5.20-5.09(m,2H),4.65-4.45(m,2H),4.21(m,1H),4.11(m,1H),3.32(m,1H),2.86(m,1H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H)。ESI+(m/z):404(M+1).

实施例21

化合物73及74的制备



向化合物18(220mg，0.5mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入间氯过氧苯甲酸(m-CPBA，110mg，0.55mmol)，室温反应2小时加入饱和硫代硫酸钠淬灭反应，分出有机层无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩。通过硅胶柱层析纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得到化合物73(100mg)及化合物74(48mg)。

化合物73

1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.15(s,1H),10.28(br,1H),8.53(s,1H),7.36(m,1H),6.82(m,2H),5.01-4.90(m,2H),4.70-4.50(m,4H),3.13(m,2H),2.25(m,1H),2.09(m,1H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H)。ESI+(m/z):452(M+1).

化合物74

1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.45(s,1H),10.42(br,1H),8.48(s,1H),7.35(m,1H),6.81(m,2H),5.29(m,2H),4.80-4.60(m,5H),2.95(m,2H),2.21(m,1H),2.05(m,1H),1.42(d,J＝7.2Hz,3H)。ESI+(m/z):468(M+1).

实施例22

化合物85的制备





步骤1

化合物A4-1(260mg，0.8mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，380mg，1mmol)和2,4-二氟苄胺(143mg，1mmol)悬浮于四氢呋喃(5mL)中，然后0℃下滴加N，N-二异丙基乙胺(DIEPA，200mg，1.6mmol)，滴加完毕后升到25℃反应2小时后加入二氯甲烷(50mL)稀释并分别用0.5N稀盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩柱层析得到化合物A4-85(305mg)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)10.44(br,1H),8.42(s,1H),7.37(m,1H),6.82(m,2H),5.18-5.09(m,2H),4.64(m,2H),4.48(m,1H),4.15(m,1H),4.06(s,3H),3.22(m,1H),2.68(m,1H),2.10(m,1H),1.81(m,1H),1.37(d,J＝6.8Hz,3H)。ESI+(m/z):450(M+1).ESI+(m/z):450(M+1).

步骤2

化合物A4-85(305mg，0.65mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入溴化镁(200mg，1.68mmol)，然后升温到50℃下搅拌反应2小时之后，冷却到0℃加入0.5N稀盐酸(10mL)。再用水(50mL)稀释，用二氯甲烷(50mL)萃取该产物，无水硫酸镁干燥萃取物并浓缩。通过硅胶柱层析纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得到化合物18(200mg)。将化合物18(90mg,0.2mmol)悬浮于甲醇(2mL)中，然后加入0.1M氢氧化钠甲醇溶液(2mL，0.2mmol)搅拌30分钟后浓缩去甲醇得到其相应的钠盐即化合物85(94mg)，为浅黄色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.55(br,1H),8.25(br,1H),7.39(m,1H),7.24(m,1H),7.08(m,1H),5.50(m,1H),4.92(m,1H),4.59-4.44(m,4H),4.11(d,J＝13.6Hz,1H),3.26(m,1H),2.60(m,1H),1.89-1.77(m,2H),1.29(d,J＝6.8Hz,3H)。

实施例23

化合物86的制备



化合物2(82mg，0.2mmol)悬浮于甲醇(2mL)中，然后加入0.1M氢氧化钠甲醇溶液(2mL，0.2mmol)搅拌30分钟后浓缩去甲醇得到其相应的钠盐即化合物86(84mg)，为类白色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.36(br,1H),8.41(s,1H),7.40(m,1H),7.25(m,1H),7.08(m,1H),5.30(m,1H),4.95(m,1H),4.76(m,1H),4.60(m,2H),4.15(m,1H),3.32(m,1H),2.85(m,1H),1.31(d,J＝6.4Hz,3H)。

本发明体外抗HIV病毒活性实验

化合物1、2、3、4、5、6、8、10、12、18、20、34、66在细胞培养内的抗HIV-1活性

I材料和方法

一、测定药物和化合物

待测样品化合物1、2、3、4、5、6、8、10、12、18、20、34、66，阳性对照化合物替诺福韦酯(tenofovir disoproxil fumarate，TDF)和度鲁特韦(dolutegravir)。待测样品溶解于DMSO中，贮存液浓度为50mM，储存条件为：4℃；TDF及dolutegravir溶解于DMSO中，贮存液浓度为100mM，储存条件为：4℃。

二、试剂和溶液

(1)试剂

MTT(3,(4,5-dimethylthiazol-2-yl,噻唑蓝)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)、Triton X-100、青霉素(Penicillin)、氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、二甲基亚砜(DMSO)、抗IgG Fc抗体、辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔IgG抗体为Sigma-aldrich公司产品。SDS(Sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠)、硫酸链霉素(Streptomycinsulfate)为Amresco公司产品。RPMI-1640、胎牛血清为Invitrogen公司产品抗HIV p24单克隆抗体和兔抗HIV-1p24多克隆抗体由本实验室制备。MTT(3,(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)、DMF(N,N’-Dimethyl formamine)、青霉素(Penicillin)、硫酸链霉素(Streptomycin sulfate)均购自Sigma公司。RPMI－1640和胎牛血清为Gibco公司产品。

(2)培养基

RPMI-1640完全培养基，含有10％胎牛血清,2mM L-谷氨酰胺，10mM HEPES，50μM 2-巯基乙醇，100,000IU青霉素，100μg/ml链霉素。

三、细胞和病毒

人T淋巴细胞系C8166、HIV-1实验株HIV-1IIIB均来自美国国立卫生研究院(National Institutes of Health,NIH)；细胞以含10％胎牛血清的RPMI-1640完全培养基进行培养。按常规方法制备HIV-1IIIB，滴定并计算出病毒的TCID50。病毒贮存液分装后，置-70℃保存。细胞和病毒按常规方法冻存和复苏。

四、HIV-1感染性滴定

HIV-1IIIB按Johnson&Byington(1990)所述方法改良进行滴定，简述如下：将HIV-1贮存液在96孔板上作4倍稀释，10个梯度，每梯度6个重复孔，同时设置对照孔6孔。每孔加入C8166细胞50μl，每孔终体积为200μl。37℃,5％CO2培养。第3天补加新鲜RPMI-1640完全培养基100μl，第7天在倒置显微镜下观察每孔中HIV-1诱导的细胞病变效应(Cytopathic Effect,CPE),以每孔是否有合胞体(Syncytium)的形成确定；按Reed&Muench方法计算病毒的TCID50(50％Tissue Culture Infection Dose)。

五、捕捉p24抗原ELISA方法测定HIV-1p24抗原

1μL/板抗鼠IgG-Fc抗体4℃铺板过夜；5％脱脂奶粉4℃封板过夜；加入100μl/孔鼠抗p24单抗，37℃，1小时；加入100μl/孔裂解感染细胞培养上清，37℃，2小时；加入100μl/孔(1：100)稀释的兔抗p24多抗(自制)，37℃，1小时；加入100μl/孔(1：20000)稀释的羊抗兔IgG-HRP，37℃，1小时；加入OPD底物反应液。10分钟后，2M硫酸终止反应。Elx800ELISA仪测定OD值，测定波长：490/630nm。计算出药物对HIV-1复制表达p24抗原的抑制率和EC50，即抑制50％HIV-1p24抗原表达的药物浓度。

六、对C8166细胞的毒性实验

4×105/ml C8166细胞悬液100μl与不同的待测药物溶液混合，设3个重复孔。同时设置不含药物的对照孔,37℃，5％CO2培养3天，采用MTT比色法检测细胞毒性。ELx800酶标仪测定OD值，测定波：570/630nm。计算得到CC50值(50％Cytotoxic Concentration)，即对50％的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的药物浓度。

七、对HIV-1IIIB致细胞病变(CPE)的抑制实验

将8×105/ml C8166细胞50μl/孔接种到含有100μl/孔梯度倍比稀释药物的96孔细胞培养板上，然后加入50μl的HIV-1IIIB稀释上清，1300TCID50/孔。设3个重复孔。同时设置不含药物的正常细胞对照孔。TDF和dolutegravir为阳性药物对照。37℃，5％CO2培养3天，倒置显微镜下(100×)计数合胞体的形成。EC50(50％Effective Concentration)为抑制合胞体形成50％时的药物浓度。

八、样品对实验株HIV-1ⅢB急性感染C8166细胞中复制的抑制作用

将4×105个/ml的C8166细胞与HIV-1IIIB MOI(感染复数)＝0.04)在37℃下感染2小时，用PBS离心洗涤3次，去除游离的病毒离子，取100μl细胞接种到含有100μl不同稀释度待测化合物的96孔板上，37℃，5％CO2培养3天。培养上清离心后收集，用终浓度0.5％Triton X-100裂解灭活。检测药物对HIV-1复制的抑制作用采用捕捉p24抗原ELISA方法。九、计算公式

根据实验结果，采用Origin2016绘制拟合曲线，按Reed&Muench法计算出样品抑制病毒的50％有效浓度(EC50)，50％抑制细胞生长浓度(CC50)及抗HIV-1活性的治疗指数TI值(Therapeutic index)为：TI＝CC50/EC50。

1、细胞生长存活率(％)＝实验孔OD值/对照孔OD值×100

2、HIV-1致细胞病变的抑制率(％)＝(1-实验孔合胞体数/对照孔合胞体数)×100

3、HIV-1p24抗原表达的抑制率(％)＝(1-实验孔OD值/对照孔OD值)×100

II化合物1、2、3、4、5、6、8、10、12、18、20、34、66在C8166细胞培养内对HIV-1的抑制作用。

用MTT法测定化合物1、2、3、4、5、6、8、10、12、18、20、34、66对细胞的毒性和抗HIV-1活性。结果参见表1。

表1 本发明化合物及阳性药物TDF和Dolutegravir体外细胞毒性和抗HIV-1活性











由表1可知，新型的含硫多环-羟基吡啶酮甲酰胺类似物均具有良好的抗HIV活性，尤其化合物2、化合物18和化合物34和化合物66体外对HIV-1复制的抑制作用非常强，具有很好的应用开发前景。该类化合物的开发对艾滋病药物的研制具有十分重要的意义，将为艾滋病患者带来福音。

上述仅为本发明的部分优选实施例，本发明并不仅限于实施例的内容。对于本领域中的技术人员来说，在本发明技术方案的构思范围内可以有各种变化和更改，所作的任何变化和更改，均在本发明保护范围之内。